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[SHDOFD2014]甘糖酯对高糖损伤的大鼠视网膜微血管内皮细胞的保护作用

玻璃体视网膜  作者:国际眼科时讯  2014/12/10 10:56:00
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内容概要:目的:观察甘糖酯对高糖条件下培养的大鼠视网膜微血管内皮细胞抗氧化及抗炎的作用,探讨甘糖酯对糖尿病视网膜病变防治的可行性及作用机制。

  杜秀娟 毕宏生 董卫红
  目的:观察甘糖酯对高糖条件下培养的大鼠视网膜微血管内皮细胞抗氧化及抗炎的作用,探讨甘糖酯对糖尿病视网膜病变防治的可行性及作用机制。
  方法:1.体外培养大鼠RMEC,传代后的大鼠RMEC培养于低糖和高糖的培养基中,利用不同浓度的甘糖酯进行干预,采用倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法、细胞生长曲线观察不同浓度的甘糖酯对高糖培养的大鼠RMEC活性的影响;2.DAPI细胞核染色观察不同浓度的甘糖酯对各组细胞核形态的影响;3.流式细胞仪检测各组大鼠RMEC的线粒体活性氧、线粒体膜电位和凋亡的情况。4.实验分为五组:A组:低糖+RMEC;B组:高糖+RMEC;C组:高糖+RMEC+ 0.02mg /ml甘糖酯组;D组:高糖+RMEC+ 0.10mg /ml甘糖酯组;E组:高糖+RMEC+ 0.50mg /ml甘糖酯组。低糖和高糖分别为含5mmol/l和23mmol/l葡萄糖的DMEM/F12培养基。
  结果:1.倒置相差显微镜下大鼠RMEC呈梭形或多边形,单层贴壁生长,边界清楚,细胞形态规则均一,立体感强。大鼠RMEC在高糖条件下细胞的活性降低,甘糖酯可以增加RMEC在高糖条件下的活性,且有浓度依赖性。2.DAPI染色结果显示高糖条件培养的RMEC细胞核变形,部分细胞核增大,异形,并见凋亡小体,甘糖酯干预后随甘糖酯的浓度增加细胞核形态逐渐规则均一。3.流式细胞仪检测B组高糖组大鼠RMEC线粒体膜电位阳性细胞数最低,C~E组甘糖酯干预组线粒体膜电位阳性细胞数增多,浓度为0.5mg/ml甘糖酯组线粒体膜电位阳性细胞数接近A组正常对照组;线粒体活性氧检测结果显示高糖使细胞的线粒体活性氧产生增加,甘糖酯干预后线粒体活性氧减少。Annexin V-FITC/PI凋亡检测,A组正常对照组细胞凋亡率为 1.26%,B组高糖组细胞凋亡率为12.73 %,甘糖酯干预组C~E组细胞凋亡率分别为9.53%、6.28%、3.01%,与B组高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05),结论:甘糖酯可以降低高糖损伤的大鼠RMEC的凋亡率,增强线粒体膜电位,降低线粒体活性氧对高糖损伤的大鼠RMEC有抗氧化的作用。
 


 
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