编者按：角膜结构复杂且精细，由上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层构成。其中，角膜上皮作为最外层的屏障，不仅抵御着外界环境中的各种物理、化学及病理因素的侵袭，还承担着维护角膜透明度和保障视力的关键职责。各种物理、化学、病理因素均可导致角膜上皮的损伤，小范围的角膜上皮损伤往往能在24小时内自然愈合，且不会留下瘢痕。然而，若损伤进一步加剧或得不到及时治疗，则可能引发溃疡、穿孔、眼内炎等严重并发症，甚至威胁到视力安全，导致失明。角膜上皮损伤的愈合过程是一个复杂的生物学过程，涉及细胞迁移、增殖、粘附和细胞层分层的分化等多个协同事件。ARVO 2024会议上，众多关于角膜上皮损伤与修复的最新研究成果和进展被展示，期待通过这些研究，能够更深入地理解角膜上皮损伤与修复的机制，为角膜损伤的临床治疗提供新的思路和策略。

自体脂肪干细胞（CM-ADSCs）培养基促进角膜上皮损伤愈合的分子机制研究

旨在深入探究CM-ADSCs培养基与富血小板血浆（PRP）相比，在促进角膜上皮损伤愈合过程中的分子机制的差异。

研究方法：采用体外人角膜上皮损伤愈合试验，对比分析了CM-ADSCs、PRP和磷酸盐缓冲液（PBS）的愈合效果。体外人角膜上皮损伤的宽度设定为70μm，每个孔（96孔板）均含有人角膜上皮细胞（HCEC）。损伤愈合后，培养基被替换为PBS、PRP和CM-ADSCs，并用HCEC基础培养基进行稀释。每3小时拍摄损伤图像，利用ImageJ软件精确计算损伤面积。在损伤愈合后的12小时，对所收集的HCEC进行RNA测序分析。

研究结果：与PBS组和PRP组相比，CM-ADSCs组在促进损伤愈合方面表现出显著优势（N=6，P<0.001，P=0.020）。具体而言，CM-ADSCs组（21.0±3.3小时）的损伤愈合时间明显快于PBS组（55.0±3.1小时，P<0.001）和PRP组（26.5±3.5小时，P<0.001）。差异表达基因分析进一步揭示，与PRP组相比，CM-ADSCs组中上调表达的基因有1503个，下调表达的基因有1417个。基因本体论富集分析显示，CM-ADSCs组中DNA代谢过程和细胞周期过程的正调控生物过程与PRP组相比显著富集。

研究结论：CM-ADSCs可能通过增强细胞增殖和DNA代谢过程，有效促进HCECs的损伤愈合。

作者：MAKO OKAMOTO、Yuichi Okumura、Takenori Inomata、Maria Miura、Keiichi Fujimoto1、 Kunihiko Hirosawa、Ken Nagino、Yuki Moroka、Fumihiro Hara、Shintaro Nakao、

标题：Cultured media from adipose derived stem cells promote corneal epithelial wound healing via increased cell proliferation and DNA metabolic process

局部浆细胞样树突状细胞（pDCs）促进小鼠角膜上皮损伤愈合的研究

旨在明确局部角膜pDCs在分泌神经营养素方面的能力，并评估这些神经营养素在组织修复过程中的核心作用。

研究方法：采用精确控制的方法，通过在C57BL/6（B6）小鼠角膜中心去除2mm上皮来制造标准化的角膜创面。利用流式细胞术，在损伤后16小时评估了角膜pDCs频率（定义为CD45+CD11bnegF4/80negB220+PDCA-1+siglece-h+细胞）以及神经营养因子在这些细胞中的表达情况。为了进一步研究pDCs的作用，通过单次结膜下注射30ng白喉毒素（DT）使pDC-DTR小鼠的pDCs局部消失。作为对照，B6小鼠也接受了DT处理。同时，pDC-DTR小鼠接受了载药处理，而B6小鼠则注射了Toll样受体（TLR）-7（R-848）或TLR9（CpG-ODN-1862）激动剂20μg以激活pDCs。非CpG-ODN治疗被用作另一对照组。通过裂隙灯下的荧光素染色，观察角膜上皮缺损的情况，并计算缺损面积占总面积的百分比。

研究结果：受伤B6小鼠角膜中的pDCs频率增加（547.2±101.9[平均值±标准误]，pDCs/角膜占总CD45+白细胞的30.2±2.3%），而未受伤小鼠的pDCs频率为73.8±5.7，占13.5±0.9%（n=5/组；P<0.01）。在受伤小鼠中，表达神经营养因子的pDCs频率（表达NGF的pDCs，48.2±0.7% vs. 31.8±3.0%；BDNF，97.6±0.3% vs. 90.1±1.3%；NT4，93.0±0.7% vs. 78.7±2.1%；GDNF，88.7±1.4% vs. 62.1±2.2%；所有P<0.01）以及pDCs中神经营养因子的表达水平（相对于未受伤小鼠的中等荧光指数倍数：NGF，3.1±0.09；BDNF，1.8±0.08；NT4/5，1.4±0.04；GDNF，2.1±0.08；所有P<0.01）均增加。此外，pDCs缺失导致角膜上皮损伤愈合延迟，表现为pDCs缺失小鼠的角膜缺损面积（48.3±11.8%）大于对照组（分别为18.9±3.4%和18.1±7.5%）（n=4/组；P<0.05）。相反，活化的pDCs加速了损伤愈合，在R-848（39.3±8.8%；P<0.01）或CpG-ODN-1862（35.0±4.5%，P<0.01）处理的小鼠中角膜上皮损伤面积较小，而非CpG-ODN处理的小鼠角膜上皮损伤面积为70.9±2.2%（n=4/组；P<0.01）。

研究结论：局部pDCs在促进小鼠急性损伤后的角膜上皮创面愈合中发挥着关键作用。

作者：Fangfang Qiu、Brendan Kenyon、Deshea L. Harris、Pedram Hamrah

讲题：Local Plasmacytoid Dendritic Cells Promote Corneal Epithelial Wound Healing

靶向纳米偶联物与DNA去甲基化剂联合应用于糖尿病（DM）角膜上皮损伤愈合的表观遗传治疗研究

DM患者的角膜上皮经常表现出愈合障碍等改变，这可能与角膜缘上皮干细胞（LESC）的功能障碍有关。为了探究DM角膜上皮愈合机制，曾采用基因治疗和DNA去甲基化手段来调节DM相关蛋白的表达，如组织蛋白酶F（在DM中表达增加）、c-Met（在DM中表达减少）和Wnt-5a（在DM中表达减少），以期刺激DM角膜上皮损伤愈合并促进LESC标志物的表达。本研究旨在探讨靶向组织蛋白酶F和c-Met的纳米生物偶联物与DNA甲基化抑制剂联合治疗的潜在效果。

研究方法：采用来自死后人类供体眼睛的DM器官培养角膜（n=6）作为实验对象。实验角膜经过预处理，使用基于含有组织蛋白酶F和miR-409（抑制c-Met）反义寡核苷酸（AON）的聚苹果酸支架的可生物降解纳米生物偶联物（NBC）或对照AON进行为期2天的处理。同时，实验角膜还接受了为期2天的20μM DNA甲基化抑制剂或DMSO对照处理。通过1-庚醇在器官培养的角膜中制造5㎜上皮损伤，并随时间监测损伤愈合情况。采用免疫染色或western blot技术检测LESC和DM标志物的表达情况。

研究结果：DNA甲基转移酶抑制剂与NBC联合处理的DM器官培养角膜能够有效抑制DNA甲基转移酶1和组织蛋白酶F的表达，同时增加Wnt-5a和c-Met的表达。这种联合处理导致角膜上皮损伤愈合时间显著减少（38.4%，P<0.02），与DMSO和NBC加AON相比具有显著差异。单独使用DNA甲基转移酶抑制剂治疗和NBC治疗分别促进了愈合率为29.4%和20.4%。此外，联合处理还增加了推定的LESC标记物、角蛋白K15和K17的表达。DM标志物整合素α3β1、氮原-1和创面愈合介质p-Akt、p-p38的染色也明显增加。值得注意的是，治疗后活化caspase-3染色无明显变化，表明该治疗方法对角膜细胞无毒性。

研究结论：DNA甲基化抑制剂与针对DM相关蛋白标记物的NBC联合治疗在DM角膜上皮损伤愈合方面具有潜在的治疗价值。

作者：Alexander V. Ljubimov、Andrei A. Kramerov、Rameshwar Patil、Cynthia Amador、Onkar Sawant、 Mehrnoosh Saghizadeh、Ruchi Shah

讲题：Combined epigenetic treatment of human organ-cultured diabetic corneas with targeted nanoconjugate and a DNA demethylating agent ameliorates epithelial wound healing and stem cell marker expression

小结:ARVO 2024会议聚焦了角膜上皮损伤与修复领域的最新研究，这些研究不仅增进了我们对角膜复杂结构和功能的认识，更为角膜损伤的临床治疗指明了新的方向。通过深入探索角膜上皮损伤的愈合机制，科学家们有望开发出更为高效、安全的治疗方法，为患者带来福音。期待这些研究成果能够尽快转化为临床应用，为角膜损伤患者提供更优质的医疗服务。

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